中国神经免疫学和神经病学杂志

2009, (05) 9-12+16

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大鼠κ-HA-pIRES2-EGFP的构建及表达
Construction of κg-HA-pIRES2-EGFP and Its Expression in HEK293

胡子有;漆松涛;张遐;颜晓慧;吴炳义;

摘要(Abstract):

目的构建带HA标签的大鼠κ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(κ-HA-pIRES2 EGFP),并实现其在HEK293细胞中的表达。方法提取大鼠脑组织总RNA,通过巢式RT-PCR扩增κ型阿片受体全长cDNA,将其克隆至pMD20-T载体中并进行测序鉴定,通过PCR引入HA标签,经酶切连接克隆入pIRES2-EGFP中,将获得的κ-HA-pIRES2-EGFP转染入HEK293细胞中,应用荧光显微镜观察EGFP表达情况,并采用细胞免疫荧光和蛋白印迹检测κ-HA表达。结果测序及酶切结果表明成功获得带HA标签的κ基因,并构建入pIRES2-EGFP表达质粒中,在荧光显微镜下可观察到转染细胞内有绿色荧光,应用免疫荧光和蛋白印迹法可观察到目的基因表达。结论利用巢式RT-PCR等技术成功构建了κ-HA-pIRES2-EGFP表达质粒,并在HEK293细胞中实现了高效表达。

关键词(KeyWords): κ型阿片受体;巢式PCR;pIRES2-EGFP;HEK293

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金海外青年学者合作研究基金资助项目(30628018)

作者(Author): 胡子有;漆松涛;张遐;颜晓慧;吴炳义;

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参考文献(References):

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