中国神经免疫学和神经病学杂志

2015, v.22(04) 237-240

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pEGFP-N1-APOE ε2重组质粒的构建与鉴定
Construction and verification of pEGFP-N1-APOE ε2 recombinant plasmid

王健;王玉洁;辛岳;姜新;

摘要(Abstract):

目的构建pEGFP-N1-APOEε2真核表达重组质粒。方法应用基因定点突变手段,根据载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因cDNA克隆基因序列和表达载体增强绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP-N1)质粒上的多克隆位点设计引物,对质粒APOE基因cDNA克隆(pMD18-T-APOE3)进行基因定点突变,得到含有APOE2基因的目的片段,将此目的片段插入载体启动子下游,与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的基因融合。重组质粒经菌液PCR、限制性内切酶酶切和测序,鉴定目的基因是否成功插入pEGFP-N1质粒。结果对所得pEGFP-N1-APOEε2质粒插入部分测序结果显示,pEGFP-N1-APOEε2质粒的方向及序列正确,阅读框正确无误,表明APOEε2基因定点突变正确,重组pEGFP-N1-APOEε2质粒构建成功。结论成功构建了pEGFP-N1-APOEε2真核表达重组质粒。

关键词(KeyWords): APOEε2基因;真核表达质粒;基因重组;绿色荧光蛋白

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 辽宁省自然科学基金计划(201102105)

作者(Author): 王健;王玉洁;辛岳;姜新;

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