中国神经免疫学和神经病学杂志

2011, v.18(04) 276-279

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人AChR-Fc融合蛋白真核表达载体的构建和表达
Construction and expression of a fusion protein containing extracellular domain of human AChRα1 and Fc fragment of human IgG1

常婷;林宏;刘煜;李柱一;

摘要(Abstract):

目的构建含人AChRα1亚单位胞外段(Hα1-210)-IgG1Fc融合基因的真核表达载体,表达人AChR-Fc融合蛋白。方法扩增Hα1-210基因,插入含有CMV启动子、小鼠Kappa链先导序列以及人IgG1从铰链区到CH3基因片段的真核表达载体pAN1782中,构建重组表达载体pAN-Hα1-210,并经酶切、测序鉴定;采用脂质体法将重组载体转染CHO-K1细胞,经G418加压筛选、ELISA检测,挑选高表达融合蛋白的阳性转化子扩大培养;表达的AChR-Fc融合蛋白经Protein A亲和层析柱纯化,SDS-PAGE、Western blot鉴定。结果酶切及测序结果证实Hα1-210基因序列正确,真核表达载体pAN-Hα1-210构建成功;ELISA检测证实AChR-Fc融合蛋白在细胞培养上清中呈分泌表达;SDS-PAGE结果显示该融合蛋白的相对分子质量约为51 000;Western blot结果显示该融合蛋白能被特异性单克隆抗体mAb198所识别。结论成功构建pAN-Hα1-210真核表达载体,并获得具有生物活性的AChR-Fc融合蛋白,为进一步开展融合蛋白靶向B细胞治疗重症肌无力的研究奠定了基础。

关键词(KeyWords): 重症肌无力;融合蛋白;真核表达;CHO-K1细胞

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金面上资助项目(30870841)

作者(Author): 常婷;林宏;刘煜;李柱一;

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