中国神经免疫学和神经病学杂志

2007, (01) 14-17

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GFAP特异性启动IκBα突变型基因真核表达载体的构建和鉴定
Construction and Identification of Eukaryotic Expression Vector that Express Mutated IκBα under the Control of GFAP Promoter

祝畅;刘志恒;张传汉;姚文龙;桂伶俐;

摘要(Abstract):

目的构建GFAP特异性启动的、能稳定表达IκBα突变型基因的真核表达载体。方法用基因工程的方法将潮霉素抗性基因和GFAP特异性启动的IκBα突变型基因定向克隆入载体pBluescript-SK中,酶切反应鉴定重组载体SK-hyg和SK-hyg-GFAP/IκBαM。用脂质体法分别将载体SK-hyg和SK-hyg-GFAP/IκBαM转入永生化星形胶质细胞株和PC12细胞株中,经潮霉素(150μg/mL)筛选,挑选阳性克隆并扩大培养,Westernblot检测阳性细胞株中IκBα的表达,以NF-κB特异性启动表达的荧光素酶报告基因检测细胞中NF-κB的活性。结果限制性酶切分析证实重组载体成功,稳定转染SK-hyg和SK-hyg-GFAP/IκBαM的PC12细胞内IκBα蛋白质表达及细胞中NF-κB活性无差异,稳定转染SK-hyg-GFAP/IκBαM的永生化星形胶质细胞内有突变型IκBα的蛋白质表达,而转染SK-hyg的永生化星形胶质细胞内则没有,且前者细胞内NF-κB活性下降。结论GFAP特异性启动的、能稳定表达IκBα突变型基因的真核表达载体构建成功。

关键词(KeyWords): 启动子;胶原纤维酸性蛋白;基因表达;IκBα

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(30300328)

作者(Author): 祝畅;刘志恒;张传汉;姚文龙;桂伶俐;

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