噬菌体抗体库的构建及抗人脑胶质瘤单抗的筛选Preliminary Screening of Monoclonal Antibody Specific for Human Brain Glioma from Phage Antibody Library
许志元,王爱东,黄强,兰青,周丽英,孙志方
摘要(Abstract):
目的 采用噬菌体展示技术制备抗人脑胶质瘤单抗。方法 以人脑胶质瘤细胞系 SHG-4 4免疫小鼠 ,取其脾淋巴细胞 ,应用噬菌体展示技术构建噬菌体抗体库 ,并筛选抗人脑胶质瘤单抗。结果 筛选得到的小鼠全套免疫球蛋白的重、轻链可变区基因片段分别为 34 0 bp和 32 5 bp,建成的抗体库库容为 5 .7× 1 0 6 ,60 /96克隆具有与肿瘤细胞结合活性 ,阳性率为 62 .5 % ,与正常人淋巴细胞则全部呈阴性反应。结论 为胶质瘤单抗制备提供了一种新的方法。
关键词(KeyWords): 单克隆抗体;噬菌体抗体库;单链抗体;基因工程;胶质瘤
基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目 ( 396 70 735 )
作者(Author): 许志元,王爱东,黄强,兰青,周丽英,孙志方
Email:
DOI:
参考文献(References):
- [1]McCaffertyJ,GriffithsAD,WinterG,etal.Phageantibodies:filamentous phage displaying antibodyvariable domains[J].Nature,1990,348:552-554.
- [2]KangAS,BarbasCF,JandaKD,et al.Linkage ofrecognition and replication functions by assemblingcombinatorial antibodyFab library along phage sur-faces[J].ProcNatlAcadSciUSA,1991,88:4363-4366.
- [3]OrlandiR,GussowDH,JonesPT,et al.Cloningimmunoglobulin variable domains for expression bythe polymerase chain reaction[J].ProcNtlAcadSciUSA,1989,86:3833-3835.
- [4]HoogenboomHR,GriffithsAD,JohnsonKS,et al.Multi-subunit proteins on the surface of filamentousphage:methodologies for displaying antibody(Fab)heavy and light chains[J].NucleicAcidsRes,1991,19:4133-4136.
- [5]SambrookJ,FritschEF,ManiatisT.Molecularcloning:A laboratory manual[M].2 nd edition.ColdSpringHarbor,NewYork:ColdSpringHarborLab-oratoryPress,1989.
- [6]黄 强.脑肿瘤分子外科学[M].北京:中国科学技术出版社,1998.88-108.