中国神经免疫学和神经病学杂志

2012, (04) 57-61

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中华眼镜蛇α-神经毒的纯化及其在烟碱型乙酰胆碱受体纯化上的应用
Isolation of α-neurotoxin from Naja naja atra venom and its application in purification of nAChR

李佳;徐江;林烨;沈佑晓;刘毅;张芳琳;吴兴安;徐志凯;李柱一;

摘要(Abstract):

目的从中华眼镜蛇粗毒中分离纯化其α-神经毒组分,并将此α-神经毒作为亲和层析的配基纯化烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)。方法采用凝胶过滤层析、阳离子交换层析逐步分离纯化中华眼镜蛇粗毒,通过125I-α-银环蛇毒素(αBtx)-nAChR结合抑制实验检测蛋白活性,SDS-PAGE检测蛋白的相对分子质量和纯度;亲和层析纯化nAChR,放射免疫沉淀法测nAChR活性。结果从5g中华眼镜蛇粗毒中共纯化得到约20mg眼镜蛇α-神经毒,该眼镜蛇α-神经毒有一定的125I-αBtx-nAChR结合抑制活性,其半数抑制浓度(IC50)约为αBtx的28倍。以纯化的α-神经毒制备的亲和介质,可吸附大鼠骨骼肌肌膜提取物中约84%的125I-αBtx结合活性,且此活性可以被0.2mol/L卡巴胆碱洗脱。结论用简单的液相色谱方法可从中华眼镜蛇毒中分离纯化α-神经毒,并且可以以其为配体从大鼠骨骼肌中纯化nAChR。

关键词(KeyWords): 眼镜蛇神经毒素蛋白质类;受体;层析

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(30870841;30972721;31100620)

作者(Author): 李佳;徐江;林烨;沈佑晓;刘毅;张芳琳;吴兴安;徐志凯;李柱一;

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