中国神经免疫学和神经病学杂志

2009, v.16(01) 35-38

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重组表达人乙酰胆碱受体α1亚基胞外域蛋白
Expression and Refolding of The Extracellular Domain of The Human Acetylcholine Receptor α1 Subunit

孙辰婧;徐江;李柱一;

摘要(Abstract):

目的获得大量正确折叠的重组人乙酰胆碱受体(AChR)α1亚基N末端胞外域(ECD)蛋白。方法用RT-PCR方法从TE671细胞中扩增出AChRα1亚基全序列,在此基础上再扩增出ECD基因序列并将其插入到原核表达载体pET16b。以构建的新载体转化E.coliBL21(DE3)pLysS,培养物以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并通过SDS-PAGE比较诱导前后蛋白表达情况。重组蛋白以Ni2+亲和层析纯化。蛋白透析复性后,以ELISA法检测活性。结果PCR产物大小为650 bp,与预计相符;所构建质粒经测序证实ECD核苷酸序列正确,并正确插入载体pET16b。诱导所产生的大量包涵体蛋白经复性后正确折叠且具活性。结论可通过原核表达获得大量正确折叠的可溶性重组人肌肉AChRα1亚基ECD蛋白。

关键词(KeyWords): 重症肌无力;乙酰胆碱受体;N-末端胞外域;主要免疫原区;mAb35

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(30570641)

作者(Author): 孙辰婧;徐江;李柱一;

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