中国神经免疫学和神经病学杂志

2009, v.16(02) 104-108

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MOG诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的建立及CD4~+CD25~+调节性T细胞检测
Establishment of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Models in Mice Induced by MOG and Testing of the Quantities of CD4+CD25+T Cells of the Models

李佳;翁益云;张旭;

摘要(Abstract):

目的探讨采用分子克隆技术合成MOC~(Igd)-TrxA融合蛋白免疫C57BL/6小鼠并建立多发性硬化(MS)动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的可行性;通过检测EAE小鼠脾脏中CD4~+CD25~+调节性T细胞数量初步探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞在EAE发病机制中的作用。方法 (1)分子克隆技术合成MOG~(Igd)-TrxA融合蛋白,纯化、超滤浓缩后用Bradford法测定蛋白浓度。(2)C57BL/6小鼠分为MOG~(Igd)-TrxA组(MOG组)、豚鼠脊髓匀浆组(GPSCH组)、硫氧还蛋白组(TrxA组)及正常对照组(NC组)4组,12只/组,各组以相应抗原乳剂免疫小鼠制作EAE模型后评估其临床神经功能、组织病理学改变(HE染色和髓鞘Luxol fast blue染色)并评价模型质量。(3)流式细胞仪(FACS)检测小鼠脾脏中CD4~+CD25~+调节性T细胞百分比。结果 (1)纯化浓缩后MOG~(Igd)-TrxA蛋白纯度达98%左右,浓度约2.3 mg/mL。(2)MOG组小鼠与GPSCH组小鼠在临床神经功能评分等方面差异无统计学意义(P>0.05)。两组发病动物组织切片HE染色和髓鞘染色均有不同程度病理改变。(3)CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T细胞比例MOG组为(4.71±1.61)%,GPSCH组为(1.44±0.65)%,均明显低于正常对照组[(9.22±1.24)%]和TrxA组[(8.97±1.20)%](P<0.01)。结论 (1)分子克隆技术合成的MOG~(Igd)蛋白免疫C57BL/6小鼠能够成功诱导出EAE模型,且模型稳定、发病率高,这为进一步研究MS免疫发病机制并采取有效治疗措施提供了一定依据。(2)CD4~+CD25~+调节性T细胞数量与EAE小鼠临床表现呈相关关系。

关键词(KeyWords): 实验性自身免疫性脑脊髓炎;CD4~+CD25~+调节性T细胞;多发性硬化

Abstract:

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基金项目(Foundation):

作者(Author): 李佳;翁益云;张旭;

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